一、基礎(chǔ)信息

1. 通用名：斑馬魚雌二醇（E2）定量檢測試劑盒（ELISA）

2. 英文名：Zebra fish Estradiol（E2）ELISA KIT

3. 規(guī)格：96T/48T

4. 檢測原理：競爭酶聯(lián)免疫法，待測 E2 濃度與標(biāo)記物結(jié)合量負(fù)相關(guān)，酶標(biāo)儀測 OD 值，擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線換算樣本濃度。

二、試劑盒組分

1. 校準(zhǔn)品：6 管，0.5ml / 管，濃度：64、25.6、9.6、3.2、1.28、0 pmol/L

2. 預(yù)包被微孔板：96T/48T

3. HRP 標(biāo)記 E2 抗原、兔抗 E2 抗體：各 6mL

4. 底物液 A、底物液 B、終止液：各 6mL（終止液為 2mol/L 稀硫酸）

5. 20× 濃縮洗滌液：30mL，含 0.15% Tween20 的 PBS 緩沖液

6. 配套：說明書 1 份、自封袋 1 個

   備注：校準(zhǔn)品無乙肝、艾滋、丙肝標(biāo)志物，整體按潛在感染物處理。

三、自備實(shí)驗(yàn)器材

四、儲存與有效期

1. 常規(guī)：2~8℃避光冷藏，禁止冷凍，總有效期 6 個月；

2. 開封后：微孔板密封干燥劑保存，校準(zhǔn)品、包被板、HRP 標(biāo)記物保質(zhì)期 14 天，其余試劑在總有效期內(nèi)穩(wěn)定。

五、樣本要求

適用樣本

前處理

保存

六、標(biāo)準(zhǔn)操作流程

1. 試劑室溫平衡 30min，濃縮洗滌液蒸餾水 1:20 稀釋待用；

2. 設(shè)空白孔、校準(zhǔn)品復(fù)孔、樣本孔，每孔加對應(yīng)校準(zhǔn)品 / 樣本 50μL；

3. 非空白孔依次加入 HRP 標(biāo)記抗原、抗體各 50μL，封板，37℃孵育 60min；

4. 洗板 3 次，每次注滿洗液靜置 10s，拍干；

5. 每孔加底物 A、B 各 50μL，混勻，37℃避光顯色 15min；

6. 每孔加終止液 50μL，空白孔調(diào)零，酶標(biāo)儀讀取 OD 值。

七、結(jié)果計(jì)算

1. 單波長酶標(biāo)儀：空白孔歸零；雙波長無需調(diào)零；

2. 結(jié)合率 = 樣本 / 校準(zhǔn)品 OD 值 ÷ 零濃度校準(zhǔn)品 OD 值；

3. Logit-ln 擬合標(biāo)準(zhǔn)曲線，人工繪圖或軟件計(jì)算樣本 E2 濃度。

八、性能指標(biāo)

1. 檢測區(qū)間：1.28~64pmol/L；檢出限≤1pmol/L；

2. 回收率：85%~115%；曲線相關(guān)系數(shù) | r|≥0.99；

3. 批內(nèi)、批間變異系數(shù) CV≤15%；

4. 液體澄清無沉淀，每次質(zhì)控結(jié)果需在合格范圍。

九、注意事項(xiàng)

生物安全

1. 樣本、廢液、耗材均按感染廢棄物處理；

2. 試劑含防腐劑、刺激性底物，佩戴手套，避免皮膚、呼吸道接觸，實(shí)驗(yàn)后洗手。

實(shí)驗(yàn)規(guī)范

1. 加樣更換槍頭防交叉污染，禁止劇烈搖晃起泡；

2. 底物變藍(lán)即失效，終止液加樣順序與底物保持一致；

3. 溫育時長、洗滌次數(shù)嚴(yán)格按標(biāo)準(zhǔn)執(zhí)行，剩余板條密封低溫存放，試劑使用前搖勻。