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植物黑色素含量比色法定量檢測(cè)試劑說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù):54 更新時(shí)間:2026-08-17
 

一、主要用途

本試劑基于堿性水解原理,可釋放樣品中可溶性黑色素分子,通過(guò)分光光度儀比色分析,實(shí)現(xiàn)植物樣品黑色素含量的定量檢測(cè)。適用于種子、葉片、根、胚胎葉、上胚軸等各類(lèi)植物組織裂解懸液的黑色素檢測(cè)。產(chǎn)品無(wú)菌、操作簡(jiǎn)便、性能穩(wěn)定、檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。

二、技術(shù)背景

黑色素是酪氨酸衍生物復(fù)合物,廣泛存在于原核生物、動(dòng)植物體內(nèi),屬于棕黑色沉積色素,不含鐵、含硫,不溶于水及常規(guī)有機(jī)溶劑,可經(jīng)強(qiáng)堿長(zhǎng)期溶解、強(qiáng)氧化劑脫色。黑色素主要分為優(yōu)黑素與褐黑素兩類(lèi),優(yōu)黑素為二羥基吲哚、二羥吲哚羧酸及其還原產(chǎn)物的多聚體,呈棕黑色;褐黑素為苯并噻嗪類(lèi)分子,呈棕紅色。
動(dòng)植物體內(nèi)黑色素多與蛋白質(zhì)結(jié)合形成復(fù)合物,由黑色素細(xì)胞合成并儲(chǔ)存于胞質(zhì)顆粒中,經(jīng)多巴氧化酶作用可轉(zhuǎn)化為多巴黑色素。真菌、酵母中黑色素主要成分為1,8-二羥基萘黑色素和多巴黑色素,分別通過(guò)聚酮通路、多酚氧化酶途徑合成,多結(jié)合于細(xì)胞壁,具備抗氧化、抵御紫外線損傷、結(jié)合鐵離子、拮抗病原菌、抵御水解酶及抗菌劑等作用。
植物黑色素多為兒茶酚黑色素,普遍存在于植物種子中,種子色澤與黑色素含量直接相關(guān),可通過(guò)轉(zhuǎn)化光能為植物代謝提供化學(xué)能。含有黑色素的樣品經(jīng)堿性水解后可釋放可溶性黑色素,在360nm波長(zhǎng)下通過(guò)分光光度儀檢測(cè)吸光度變化,即可計(jì)算樣品總黑色素含量。

三、產(chǎn)品內(nèi)容

清理液(Reagent A):若干毫升
裂解液(Reagent B):若干毫升
處理液(Reagent C):若干毫升
溶解液(Reagent D):若干毫升
緩沖液(Reagent E):若干毫升
標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent F):若干毫升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū):1份

四、保存方式

標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent F)于-20℃避光保存,其余試劑4℃保存;溶解液(Reagent D)、緩沖液(Reagent E)、標(biāo)準(zhǔn)液(Reagent F)具有腐蝕性,操作時(shí)需做好防護(hù)。產(chǎn)品有效期6個(gè)月。

五、用戶(hù)自備器材與設(shè)備

1.5mL離心管、15mL錐形離心管、DOUNCE勻漿器、恒溫培養(yǎng)箱/恒溫水槽、微型臺(tái)式離心機(jī)、1mL比色皿、分光光度儀。

六、實(shí)驗(yàn)步驟

(一)樣品準(zhǔn)備

1. 稱(chēng)取200mg新鮮植物組織(葉片、谷粒、種子等);
2. 可選:將樣品置于預(yù)冷15mL錐形離心管中,加入適量清理液清洗1次;
3. 用刀片切碎組織,放入預(yù)冷15mL錐形離心管;
4. 加入適量預(yù)冷裂解液,渦旋震蕩5s混勻;
5. 冰浴條件下用勻漿器勻化組織(約80次);
6. 將勻漿轉(zhuǎn)移至1.5mL離心管,4℃、5000g離心10min;
7. 吸取500μL上清液至新離心管,取10μL上清液用于蛋白質(zhì)定量檢測(cè);
8. 剩余樣品16000g離心5min,棄上清;
9. 向沉淀中加入適量處理液,16000g、4℃離心5min,棄上清;


 
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