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ELISA（酶免）試劑盒
人ELISA試劑盒
首 頁 | 體外非細胞系統(tǒng)CYP3A4活性熒光定量檢測試劑盒說明書 |
| 點擊次數(shù)：32 更新時間：2026-05-25 |
注：本文件為語燕生物精簡版說明書，完整詳細操作手冊、參數(shù)細則及技術答疑可咨詢語燕生物工作人員獲取。 一、主要用途（貨號）本試劑盒為語燕生物優(yōu)化研發(fā)的熒光定量檢測試劑，基于BFCD反應體系，依托NADPH生成系統(tǒng)，檢測芐氧基三氟甲基轉化為羥基三氟甲基（HFC）的熒光峰值變化，定量檢測CYP3A4酶活性。適用于血清、血漿、純化微粒體、CYP3A4純酶等樣本的活性檢測。產品無菌即用、操作便捷、性能穩(wěn)定，可滿足CYP3A4酶活性常規(guī)檢測需求。 二、技術背景細胞色素P450酶是人體關鍵代謝酶系，包含五十余種亞酶，其中CYP3A4占肝臟P450總量30%、腸道P450總量70%，介導市場超60%藥物的氧化、羥化代謝，是藥物代謝、毒理學研究的核心靶點，人源CYP3A4對應小鼠3A11亞酶。 語燕生物采用成熟BFCD特異性檢測體系，以芐氧基三氟甲基為特異性底物，在NADPH體系輔助下，CYP3A4催化底物生成具有熒光特性的HFC，通過檢測激發(fā)波長410nm、發(fā)射波長538nm的熒光信號，定量檢測酶活性，適配CYP3A4檢測需求。 三、試劑盒組分本套試劑由語燕生物標準化配比制備，組分齊全、配比穩(wěn)定，具體如下：
四、保存條件與有效期全程-20℃避光冷藏保存，其中反應液、底物液、標準液需嚴格避光，避免反復凍融。語燕生物規(guī)范把控試劑品質，產品有效保質期為6個月。 五、用戶自備器材與設備為匹配語燕生物本試劑盒檢測體系，需自備以下常規(guī)實驗器材：
六、實驗操作步驟（精簡版）實驗前將試劑盒所有試劑置于冰槽融化，全程避光操作，參照語燕生物標準化流程開展實驗。 （一）測定準備1、待測樣本（微粒體、純酶、體液樣本等）冰上預冷備用，樣本需澄清無雜質； 2、儀器參數(shù)預設：溫度37℃，激發(fā)波長410±20nm、發(fā)射波長530±25nm，開機調零； 3、取5支1.5mL離心管標記1-5號，每管加入定量緩沖液Reagent A； 4、梯度稀釋標準液：1號管加標準液，依次梯度稀釋至4號管，5號管為空白對照； 5、所有標準管冰上避光保存?zhèn)溆谩?/div> （二）標準曲線測定1、離心管中依次加入定量緩沖液、反應液、4μL底物液、20μL梯度標準液； 2、37℃避光孵育30min，可根據(jù)酶活性調整為45min； 3、加入定量終止液混勻，轉移至檢測載體； 4、上機檢測獲取RFU值，扣除空白對照（5號管）熒光值，得到實際熒光強度； 5、以HFC濃度為X軸、實際RFU值為Y軸，繪制標準曲線（語燕生物可提供標準曲線擬合參考方法）。 （三）樣品活性測定1、離心管中依次加入定量緩沖液、反應液、底物液，加入20μL澄清待測樣本； 2、37℃避光孵育30min，酶活性偏低可延長至45min； 3、加終止液混勻后上機檢測，扣除空白熒光值； 4、結合標準曲線，換算樣本對應的HFC濃度，用于酶活性計算。 （四）活性計算依據(jù)語燕生物定義的酶活性標準計算：37℃、pH7.5條件下，每分鐘轉化1nmol芐氧基三氟甲基為HFC的酶量，即為1個CYP3A4活性單位。完整計算公式可咨詢語燕生物獲取。 七、關鍵注意事項1、試劑盒總通量為25次檢測（含標準曲線測定），適配常規(guī)實驗需求； 2、全程佩戴實驗手套，標準曲線單次實驗僅需測定1次，無需重復制備； 3、待測樣本需保持澄清狀態(tài)，樣本渾濁會影響檢測結果準確性；語燕生物可提供配套細胞可溶性總蛋白質制備試劑盒（30002.1）用于樣本前處理。 4、若檢測酶活性偏低，可在37℃條件下將孵育時長調整至45分鐘。 5、熒光檢測完成后，需清洗比色皿，避免殘留物質干擾后續(xù)檢測。 6、不同待測樣本需對應標準蛋白濃度：血清樣本100微克/20微升、微粒體樣本20微克/20微升、純酶蛋白樣本10微克/20微升；語燕生物配套提供Bradford蛋白質濃度定量試劑盒（30030.1），可用于樣本蛋白濃度標定。 7、待測樣本濃度偏高或偏低時，可適度調整樣本濃度后重新檢測。 8、可采用CYP3A4抑制劑（CISAPRIDE，IC50＝60納摩爾）設置抑制劑對照或陰性對照，提升實驗嚴謹性。 9、CYP3A4酶活性單位定義：37℃、pH 7.5環(huán)境下，每分鐘轉化1納摩爾芐氧基三氟甲基為羥基三氟甲基的酶量，即為一個酶活性單位。 10、語燕生物可提供各類毒理學檢測配套試劑產品，適配相關實驗拓展需求。 |
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