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干細(xì)胞成脂分化潛力比色法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書
主要用途
干細(xì)胞成脂分化潛力比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過脂溶性偶氮染料油紅O 特異性地使細(xì)胞內(nèi)脂滴顯
示紅色或深紅色，在分光光度儀上進(jìn)行比色測(cè)定，以分析脂肪細(xì)胞分化和脂肪組織形成程度的而經(jīng)典
的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種人體和動(dòng)物干細(xì)胞的成脂細(xì)胞分析。
產(chǎn)品嚴(yán)格無菌，即到即用，性能穩(wěn)定，著色清晰。
技術(shù)背景
胚胎干細(xì)胞來自于胚囊（blastocyst），其具有分裂和自我復(fù)制的能力，以及分化（differentiation）成為肌肉
細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞，以及其它非特定類型（unspecialized）細(xì)胞等潛力。干細(xì)胞或模式細(xì)胞的成脂細(xì)胞分化潛
力，即由一系列形態(tài)和生化方面的變化而產(chǎn)生脂滴的過程，作為研究脂肪組織形成的分子基礎(chǔ)和信號(hào)通路，
以及肥胖癥的發(fā)生和發(fā)展的機(jī)制的模式系統(tǒng)。油紅O（OIL RED O），又稱為27號(hào)紅色溶劑（SOLVENT RED
27）、蘇丹紅5B（SUDAN RED 5B），是優(yōu)于氫醇染料溶劑（HYDROALCOHOLIC DYE SOLVENT）的脂溶
性偶氮染料（LYSOCHROME DIAZO DYE）。其分子式為C26H24N4O，分子量為408.51。通過經(jīng)典的油紅O
染色脂滴（成脂分化的標(biāo)志）為紅色或深紅色。在分光光度儀或酶標(biāo)儀上（520nm波長）進(jìn)行測(cè)定，來定
量分析脂肪細(xì)胞分化和脂肪組織形成的程度。
產(chǎn)品內(nèi)容
清理液（Reagent A） 20 毫升
固著液（Reagent B） 20 毫升
凈化液（Reagent C） 20 毫升
染色液（Reagent D） 10 毫升
溶解液（Reagent E） 5 毫升
產(chǎn)品說明書1 份
保存方式
保存染色液（Reagent D）在4℃冰箱里，其余的保存在室溫下；確保瓶蓋密閉。染色液（Reagent D），避
免光照，有效保證6 月
用戶自備
顯微鏡：用于觀察細(xì)胞脂滴染色
平式搖蕩儀：用于染色萃取的混勻
比色皿或酶標(biāo)板：用于比色分析的容器
分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于定量檢測(cè)成脂細(xì)胞
實(shí)驗(yàn)步驟
1． 小心抽掉多孔細(xì)胞培養(yǎng)板里的培養(yǎng)液
2． 輕輕加入適量的清理液（Reagent A）到每個(gè)培養(yǎng)孔里（見下表）
3． 小心抽去清理液
4． 小心加入適量的固著液（Reagent B）到每個(gè)培養(yǎng)孔里（見實(shí)驗(yàn)步驟2 表）
5． 室溫下孵育10 分鐘
6． 小心抽去固著液
7． 小心加入適量的凈化液（Reagent C）到每個(gè)培養(yǎng)孔里（見實(shí)驗(yàn)步驟2 表）
8． 小心抽去凈化液
9． 小心加入適量的染色液（Reagent D）到每個(gè)培養(yǎng)孔里（見下表）
10．在室溫下靜置15 分鐘
11．小心抽去染色液
12．小心加入適量的凈化液（Reagent C）到每個(gè)培養(yǎng)孔里（見實(shí)驗(yàn)步驟2 表）
13．小心抽去凈化液
14．重復(fù)實(shí)驗(yàn)步驟12 和13 二次，或凈化液不再顯示粉紅色
15．（選擇步驟）置于一般光學(xué)顯微鏡下觀察染色：脂滴（LIPID DROPLET）呈現(xiàn)深紅色
16．小心加入適量的溶解液（Reagent E）（見下表）
17．輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)板，直到溶解液（Reagent E）均勻分布
18．置于平式搖蕩儀，在室溫下，孵育30 分鐘，速度為50RPM
19．（選擇步驟）移入到比色皿
20．即刻放進(jìn)分光光度儀或酶標(biāo)儀測(cè)讀，波長為520 nm
21．構(gòu)建成脂細(xì)胞定量曲線：橫座標(biāo)（x 軸）為細(xì)胞濃度（細(xì)胞量）；縱坐標(biāo)（y 軸）為樣品讀數(shù)（吸光單
位OD 值）
注意事項(xiàng)
1． 本產(chǎn)品為20 次（24 孔板）、50 次（48 孔板）、100 次（96 孔板）操作
2． 操作時(shí)須戴手套
3． 試劑瓶務(wù)必密封保存
4． 染色液（Reagent D）避免－20℃低溫保存，否則出現(xiàn)沉淀
5． 如果染色液（Reagent D）出現(xiàn)沉淀，須過濾后再使用
6． 染色時(shí)，避免光照
7． 細(xì)胞染色前后的清洗過程中，小心操作，以免將細(xì)胞沖洗掉，而影響定量分析
8． 如果沒有520nm 波長的濾波器，可以使用490nm 波長替代
9． 本公司提供系列脂質(zhì)檢測(cè)試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2． 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定著色清晰